300kd ہولو فائبر الٹرا فلٹریشن: ایک اعلی-پاؤں کے لیے کارکردگی کا ارتکاز اور صاف کرنے کے عمل کا تجزیہ-اور-منہ کی بیماری O/A وائرس
Sep 03, 2026| تعارف
پاؤں-اور-منہ کی بیماری (FMD) ایک شدید، بخار، اور انتہائی متعدی جانوروں کی بیماری ہے جو پاؤں-اور-منہ کی بیماری کے وائرس (FMDV) کی وجہ سے ہوتی ہے۔ یہ وائرس کلون-کھروں والے جانوروں کو متاثر کرتا ہے، جن میں 70 سے زیادہ حساس انواع ہیں۔ یہ تیزی سے پھیلتا ہے اور اس کی بیماری کی شرح زیادہ ہوتی ہے، عام طور پر بڑے مویشیوں جیسے سور، بھیڑ اور مویشی متاثر ہوتے ہیں، جہاں یہ واقعات 100% تک پہنچ سکتے ہیں۔ FMDV کا تعلق نسل سے ہے۔پاؤں-اور-منہ کا وائرسMicroRNAviridae خاندان کا۔ یہ ذرات کروی ہیں، تقریباً 27-30 nm قطر کے، برقرار وائرل ذرات کے لیے 146S کے تلچھٹ کے گتانک کے ساتھ۔ فی الحال، مختلف ایف ایم ڈی ویکسینز دستیاب ہیں، جن میں اٹینیویٹڈ لائیو وائرس ویکسین، لائیو وائرس ویکٹر ویکسینز، غیر فعال ویکسین، نیوکلک ایسڈ ویکسین، مصنوعی پیپٹائڈ ویکسین، اور سبونائٹ ویکسین شامل ہیں۔ غیر فعال ایف ایم ڈی ویکسین کے عام طور پر جانوروں میں کم ضمنی اثرات ہوتے ہیں، اور ملٹی ویلنٹ ویکسین حفاظتی ٹیکوں کی بہتر افادیت پیش کرتے ہیں، جو انہیں چین میں ایف ایم ڈی کی روک تھام کا بنیادی مرکز بناتے ہیں۔
ٹینجینٹل فلو الٹرا فلٹریشن
فی الحال، ٹینجینٹل فلو الٹرا فلٹریشن ایک عام طور پر استعمال شدہ طہارت اور ارتکاز کا طریقہ ہے جس میں پیروں کی بڑے پیمانے پر پیداوار-اور-منہ کی بیماری ملٹی ویلنٹ غیر فعال ویکسین ہے۔ یہ طریقہ نہ صرف مطلوبہ ارتکاز کا عنصر حاصل کرتا ہے بلکہ بڑی مقدار میں غیر ملکی نجاست کو بھی دور کرتا ہے۔ ٹینجینٹل فلو الٹرا فلٹریشن بنیادی طور پر طہارت، ارتکاز، اور فلٹریشن (ڈیسالٹنگ اور بفر کی تبدیلی) کے لیے استعمال ہوتا ہے۔ اس کے علاوہ، یہ ٹینجینٹل فلو مائیکرو فلٹریشن کا استعمال کرتے ہوئے ابال کے شوربے یا سیل کلچر میڈیم کی وضاحت کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے، اس طرح سینٹرفیوگریشن یا بنیادی وضاحت کی جگہ لے لیتا ہے۔
روایتی عمودی فلٹریشن میں، بڑے مالیکیول جھلی کی سطح پر جمع ہوتے ہیں، فلٹر کو روکتے ہیں۔ ٹینجینٹل فلو فلٹریشن، تاہم، بہاؤ کو جھلی کے متوازی آگے بڑھنے کی اجازت دیتا ہے، اس بند ہونے والے مسئلے سے بچتا ہے۔ ٹینجینٹل فلو فلٹریشن کے دوران، جھلی کے سوراخ کے سائز سے چھوٹے سالوینٹ اور مادے جو جھلی کے ذریعے پھیلتے ہیں انہیں پرمییٹ کہا جاتا ہے، جب کہ تاکنا کے سائز سے بڑے مادوں کو ارتکاز کے طور پر برقرار رکھا جاتا ہے۔ بہتر دھونے اور فلٹریشن کے عمل کے ساتھ مل کر، مختلف سائز کے مالیکیولز کی علیحدگی اور تطہیر حاصل کی جا سکتی ہے۔ یہ ٹیکنالوجی فوائد پیش کرتی ہے جیسے کم لاگت، ہلکے آپریٹنگ حالات، آسان صفائی اور تبدیلی، اعلی جھلی کے پرمییٹ بہاؤ کی شرح، اور سادہ آپریشن، یہ خاص طور پر بڑے پیمانے پر ارتکاز اور بائیو ایکٹیو مادوں کی تطہیر کے لیے موزوں بناتی ہے۔
مواد اور طریقے
کھوکھلی فائبر کالم:مالیکیولر ویٹ کٹ آف 300kd، جھلی کا رقبہ 1600cm²۔
مواد:5.6L FMDV ٹائپ O سے ہر ایک سپرنٹنٹ اور سینٹرفیوگریشن اور وضاحت کے بعد A ٹائپ کریں۔
عمل کے پیرامیٹرز:الٹرا فلٹریشن ارتکاز کے دوران، شیئر فورس کو تقریباً 3000⁻¹ میں ایڈجسٹ کیا گیا تھا، اور TMP کو 10 psi سے زیادہ نہ ہونے پر کنٹرول کیا گیا تھا۔ جب ارتکاز کا عنصر 11 بار قریب آیا تو نمونے کو 6CV بفر محلول سے دھویا گیا۔ دھونے کے بعد، جراثیم سے پاک ہوا کو انلیٹ ٹیوب میں داخل کیا گیا، اور نلیاں میں موجود تمام مرتکز نمونے کو نمونے کی حراستی کی بوتل میں انجکشن کیا گیا۔ اس کے بعد، جراثیم سے پاک پی بی ایس کو نلیاں دھونے کے لیے شامل کیا گیا جب تک کہ مرتکز مائع کا حتمی حجم 500 ملی لیٹر نہ ہو، اس طرح مجموعی بحالی کی شرح میں بہتری آئی۔
نتائج اور بحث
ابتدائی وائرس صاف کرنے کے لحاظ سے، الٹرا فلٹریشن ارتکاز 90% سے زیادہ نجاستوں کو ہٹانے کی شرح حاصل کرتا ہے جیسے پروٹین جس میں وائرس نہیں ہوتے ہیں۔ حجم کے لحاظ سے، یہ 10-50 گنا زیادہ ارتکاز حاصل کر سکتا ہے، جو بعد میں صاف کرنے کے لیے مضبوط مدد فراہم کرتا ہے۔ 300kd کے مالیکیولر ویٹ کٹ آف کے ساتھ ایک کھوکھلی فائبر کالم کا انتخاب کیا گیا ہے۔ یہ چھید کا سائز، 85% سے زیادہ وائرس کو برقرار رکھتے ہوئے، 90% سے زیادہ ناپاک پروٹین کو ہٹا سکتا ہے۔ جھلی کا رقبہ 1600 cm² ہے، اور تھرو پٹ 2-5 mL/cm² ہے، جو الٹرا فلٹریشن ارتکاز کو مؤثر وقت (2 گھنٹے کے اندر) میں مکمل کرنے کے قابل بناتا ہے۔ تفصیلی الٹرا فلٹریشن ارتکاز اور طہارت کا ڈیٹا ٹیبل 1 میں دکھایا گیا ہے۔
ٹیبل 1. پاؤں-اور-منہ کی بیماری کے اینٹیجنز (قسم O اور A) کی مکمل کھوج کے نتائج
| نمونہ کا نام | مائع فیڈ | حجم (mL) | 146S مواد (ug/mL) | 146S ریکوری ریٹ (%) | پروٹین کا ارتکاز (ug/mL) | پروٹین ہٹانے کی شرح (%) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| O-قسم | اصل حل | 5600 | 2.53 | 87.94 | 5040 | 94.38 |
| O-قسم | توجہ مرکوز کرنا | 500 | 24.92 | 87.94 | 3170 | 94.38 |
| ایک-قسم | اصل حل | 5600 | 3.37 | 94.80 | 5980 | 93.55 |
| ایک-قسم | توجہ مرکوز کرنا | 500 | 35.78 | 94.80 | 4318 | 93.55 |
طہارت کے طریقہ کار کے تحفظات
فی الحال، صاف کرنے کے مختلف طریقے ہیں، لیکن ایک ہی اینٹیجن کے لیے ایک ہی طریقہ کے ساتھ بھی، پیوریفیکیشن اثر اکثر کئی وجوہات کی بنا پر غیر اطمینان بخش ہوتا ہے، بشمول اینٹیجن کی خصوصیت اور عمل کے پیرامیٹرز۔ مثال کے طور پر، اپ اسٹریم مالیکیولر ڈیزائن یا فرمینٹیشن کلچر سسٹم میں تبدیلیاں وائرل مالیکیولر ڈھانچے کو تبدیل کر سکتی ہیں، جس سے صاف کرنے کے غیر اطمینان بخش نتائج برآمد ہوتے ہیں۔ وضاحت کے نامناسب طریقے خام مال کی لاگت یا ہیٹرولوگس پروٹین کی مقدار کو بڑھا سکتے ہیں، جس سے نیچے کی طرف صاف کرنے پر دباؤ بڑھتا ہے۔ غیر مناسب الٹرا فلٹریشن ارتکاز، جیسے مختلف الٹرا فلٹریشن جھلی کے تاکنے کے سائز، ارتکاز اور اخراج کے عوامل، داخلی بہاؤ کی شرح، فلٹریشن کی شرح، اور TMP، کے نتیجے میں اینٹیجن کی بحالی کی شرح کم ہو سکتی ہے۔ وسیع پیمانے پر مشق سے پتہ چلتا ہے کہ ناقص صفائی جانوروں میں حفاظتی ٹیکوں کے بعد اہم منفی ردعمل کا سبب بن سکتی ہے، جو ممکنہ طور پر موت کا باعث بنتی ہے۔
نتیجہ:یہ مطالعہ ظاہر کرتا ہے کہ ٹینجینٹل بہاؤ کے عمل میں، مناسب میمبرین پور سائز (300kd)، واشنگ ریشو، انلیٹ فلو ریٹ، اور TMP کا انتخاب کر کے، ہائی ریکوری ریٹ اور زیادہ سے زیادہ نجاست کو ہٹانا دونوں کو یقینی بنایا جا سکتا ہے۔